核酸檢測室氣溶膠產生及預防

    核(he)酸檢測實驗是微觀的(de)(de)(de)，基于(yu)細(xi)胞，分子，蛋白水平(ping)，而這些微觀樣本(ben)對外界環(huan)境的(de)(de)(de)影響敏感(gan)，比如溫(wen)度(du)、ph值、酶解、損傷等，在我(wo)們盡力(li)呵護樣本(ben)的(de)(de)(de)生存環(huan)境的(de)(de)(de)同時，污(wu)染也是需要(yao)注意的(de)(de)(de)頭(tou)等大(da)事，要(yao)堅決避免環(huan)境中(zhong)的(de)(de)(de)“雜(za)質”的(de)(de)(de)亂(luan)入，包括樣本(ben)污(wu)染，試劑儀器交叉污(wu)染、產(chan)物氣溶膠污(wu)染等對實驗結(jie)果的(de)(de)(de)影響。“易查不易察”，污(wu)染來的(de)(de)(de)悄(qiao)無(wu)聲息，防不勝防，假(jia)陽性(xing)結(jie)果讓無(wu)數(shu)核(he)酸檢測人員抓狂和崩潰。
   一旦(dan)出現(xian)實(shi)驗室(shi)環境(jing)污染，比如樣本之間交叉污染、試劑污染、儀器污染、陽性對照污染、PCR擴(kuo)增(zeng)產(chan)物污染、氣溶(rong)(rong)膠污染等，其中(zhong)氣溶(rong)(rong)膠污染是(shi)一個非常(chang)重(zhong)要而(er)被忽視的(de)污染源。實(shi)驗室(shi)出現(xian)氣溶(rong)(rong)膠污染，需要較長(chang)的(de)時(shi)間進行(xing)*。
 
一、氣溶膠污染原因
1、樣本之間交叉污染。
標本污(wu)染(ran)(ran)主要有(you)收集標本的(de)容(rong)器被污(wu)染(ran)(ran)；標本存放(fang)運輸時，由于密封不嚴或容(rong)器外粘有(you)標本而造成相互間交叉污(wu)染(ran)(ran)；核酸(suan)模板在提取(qu)過程(cheng)中，由于加樣槍污(wu)染(ran)(ran)導致標本間污(wu)染(ran)(ran)；手動提取(qu)核酸(suan)樣本時，污(wu)染(ran)(ran)的(de)手套觸摸離心管內蓋導致的(de)污(wu)染(ran)(ran)；有(you)些微生物標本尤其(qi)是病(bing)毒可(ke)隨(sui)氣溶(rong)膠或形(xing)成氣溶(rong)膠而擴(kuo)散，導致彼此間的(de)污(wu)染(ran)(ran)。
2、PCR試劑污染
PCR試劑在配(pei)制(zhi)過程中，移液槍、槍頭(tou)、離心管等原因造成試劑被(bei)PCR核酸模板污染。
3、不同工作區(qu)域移液槍等耗(hao)材交叉(cha)使用。
 ;將易污(wu)染(ran)區域的移液槍、槍頭、離心(xin)管等耗材拿到潔(jie)凈區使用引(yin)起的污(wu)染(ran)；
4、離心(xin)機轉(zhuan)子(zi)未(wei)定期擦(ca)拭。
離(li)(li)心(xin)(xin)機通常進行各種試劑組分、不同盲樣的離(li)(li)心(xin)(xin)，如果離(li)(li)心(xin)(xin)管(guan)外(wai)部沾染病(bing)毒、陽性核(he)酸或陽性質粒，容易造成(cheng)污染。
5、陽性(xing)對照造成的污染(ran)。
開蓋時間(jian)過長高(gao)濃度質粒揮發到室內，陽性對照組分未使用完任(ren)意丟棄，加完陽性對照的槍頭未放入消(xiao)毒(du)液中。
6、擴增產物開蓋(gai)造成(cheng)的污染。
這是PCR試驗中主要、常見的污染原因。因為PCR產物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測拷貝的極限，PCR產物開蓋后，極易迅速造成擴散，極微量的PCR產物污染，就可形成假陽性。
7、各(ge)個(ge)實(shi)驗(yan)室擦桌布、掃(sao)把(ba)，簸箕，工作(zuo)服交叉使(shi)用。
 
二、核酸檢測實驗室(shi)如何(he)預(yu)防污(wu)染
1、合(he)理的實(shi)驗(yan)分區
原則上可以設(she)置3個獨立的(de)工作區域(yu)：
試劑耗材儲(chu)存(cun)與(yu)準備(bei)(bei)區、標本處理和標本準備(bei)(bei)區（核(he)酸純化）、擴增(zeng)檢測(ce)區，各區域空間*相(xiang)互(hu)獨立，不能(neng)直(zhi)接相(xiang)通。其中(zhong)試劑耗材儲(chu)存(cun)與(yu)準備(bei)(bei)區必須獨立設置。
實驗(yan)室實施(shi)空(kong)氣(qi)流向控制，擴增(zeng)前和擴增(zeng)后(hou)區域(yu)應具有獨立通風系(xi)統，擴增(zeng)后(hou)區域(yu)保持負壓(ya)狀態，其它區域(yu)保持正壓(ya)狀態，防(fang)止(zhi)擴增(zeng)產物進(jin)入擴增(zeng)前的區域(yu)。
 
2、實驗操作流程：
（1）樣(yang)品制備區進行樣(yang)品處理，核酸提取(qu)；
（2）配液區配置反(fan)應(ying)體(ti)系：酶混合液和(he)PCR反(fan)應(ying)液混合，分裝至PCR反(fan)應(ying)管；
（3）樣品制備(bei)區加樣：樣品核酸和陰陽(yang)性(xing)對照加至反應液中；
（4）PCR擴增區(qu)上機擴增檢(jian)測。務必保持單向操作(zuo)流程(cheng)，避免各區(qu)實驗室污染。
3、各個實驗(yan)(yan)區內(nei)試驗(yan)(yan)用品專區
配液區是(shi)潔凈(jing)的(de)試驗(yan)區域，樣品制備區的(de)潔凈(jing)度稍差， PCR擴增區內是(shi)易被污(wu)染(ran)的(de)區域，各區之間試驗(yan)物品專區，避免因(yin)交叉使用造成實驗(yan)室污(wu)染(ran)。
4、試驗操(cao)作要規(gui)范
    （1）正確使(shi)用移(yi)液槍，保證試劑配比和計量正確，同時避(bi)免液體吸入移(yi)液槍口造成污(wu)染。
    （2）實驗的過(guo)程中應勤換手(shou)套(tao)，在進出不(bu)同(tong)區域(yu)或進行模板(ban)操作后，都(dou)應及時更換手(shou)套(tao)。
    （3）試劑盒各組(zu)分在(zai)打開(kai)(kai)之前應先做瞬時(shi)離心(約10s)，將管壁及管蓋(gai)上的液體甩至(zhi)管底部，從而減(jian)少污染手套或加樣器的機會。開(kai)(kai)管動作要輕，以防管內液體濺(jian)出或形成氣溶膠，造成污染。
    （4）樣本量(liang)較多(duo)時，應(ying)將反應(ying)液預混，再分裝至PCR反應(ying)管，后添(tian)加核(he)酸模板(ban)，以減(jian)少單(dan)個添(tian)加操作繁瑣(suo)造成的污染(ran)。
    （5）每(mei)次試驗必須設定陰性(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)和(he)陽性(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)，讀(du)取(qu)結(jie)果(guo)時，在(zai)保(bao)證(zheng)陰陽性(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)均成立的情況下，判讀(du)樣本結(jie)果(guo)才有(you)效(xiao)。
（6）實驗(yan)結束后，PCR反應(ying)管嚴禁打開，及時放置(zhi)殺孢子劑消毒(du)液中浸泡(pao)。
 
三、解決核酸實驗室污染方法
（1）開(kai)窗通(tong)風(feng)：如(ru)在短時間(jian)內要消除實驗室污染，開(kai)窗通(tong)風(feng)促進實驗室內空(kong)氣流通(tong)，使停留在室內的核(he)酸排放到室外。
（2）紫外燈照(zhao)射：將(jiang)實驗室(shi)內(nei)(nei)(nei)好生物安全(quan)柜內(nei)(nei)(nei)物品平鋪(pu)，打(da)開(kai)離心機內(nei)(nei)(nei)蓋，然(ran)后將(jiang)紫外等打(da)開(kai)照(zhao)射12-24小時(shi)，通風12小時(shi)以(yi)上。
（3）消毒液(ye)降解(jie)核酸(suan)：及時(shi)用諾福過氧化氫(qing)殺孢子(zi)劑擦(ca)拭操作臺面(mian)和儀(yi)器(qi)，按照1:10稀釋浸泡試(shi)驗器(qi)具，同時(shi)按照1:3比例稀釋涮(shuan)洗拖(tuo)布擦(ca)拭地(di)面(mian)。
（4）高壓(ya)：試驗耗材、工作衣等進行121℃30分鐘(zhong)高壓(ya)。

（5）使用核(he)酸污染清洗(xi)液噴灑室內降解核(he)酸。

（6）陽性污染特別嚴重，可以采取干霧過氧(yang)化氫消毒熏蒸實驗室。

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